Полимеразная цепная реакция в реальном времени

Несомненно, все кто учил молекулярную биологию, знают, что молекулярная биология реального времени является лабораторным методом, основанным благодаря методу полимеразной цепной реакции, который, в свою очередь, используют для того, чтобы измерить общее количество этой молекулы ДНК есть оснащение ПЦР лаборатории.

Данный метод входит одновременно детекция и количественный определитель специфических последовательностей ДНК, которые находятся в образце. Этот метод используется по принципу обратной транскрипции, что в свою очередь дает возможность тому кто исследует ДНК, получить содержательную информацию на самой клетке, в последствии чего можно сделать выводы из уровня экспрессии того или иного гена, находящегося в отдельной клетке и ткани.

Как происходит данный метод?

  • Общий процесс похож на классическую процедуру, в которой действенности реакции при высокой температуре, которая достигает до 95 градусов по Цельсию.
  • На сегодняшний день эта процедура гораздо упрощенная, которая достигается благодаря использованию высокоспецифическим флуоресцентным зондам. В данном случае насчитывают всего лишь два метода генерация света таких зондов в момент элонгации и при отжиге.
  • На самой ранней стадии флуоресценция является очень слабой из-за дефицита продукта, что в свою очередь, затрудняет ее отличие от общего фона. И чем больше быстрее накапливается продукт, тем сильнее подается сигнал.

Если продукта достаточно много, то в таком случае ограничивающим средством может послужить фермент вследствие чего, зависимость от продукта меняется на линейную. Важно понимать, что данная величина зависит напрямую от, как ни странно, но случайных факторов, таких как чувствительность детектора или качественного фильтра.

Именно поэтому, просто невозможно точно измерять общее количество на начальном этапе, для того, чтобы решить этот вопрос методов маркировки. Эти методы позволяют измерить соотношение количества обеих молекул в пробирке.

ПЦР в реальном времени направлено на определение детекции количества ДНК во время пробы. Но в данное время используют несколько видоизмененных видов реакции для данной детекции. Реакции с обратной транспортация, которая обширно применяется для характеристики и сравнение уровня в различных популяция. Для начала проведения данной реакции нужно акции на обратную транскрипцию для синтеза ДНК.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *